單細(xì)胞全基因組測(cè)序是在單細(xì)胞水平上對(duì)全基因組進(jìn)行擴(kuò)增與測(cè)序的一項(xiàng)技術(shù)，是近年來(lái)研究最為熱門(mén)最為前沿的技術(shù)之一。原理非常簡(jiǎn)單，首先將要研究的單個(gè)細(xì)胞分離出來(lái)進(jìn)行全基因組DNA擴(kuò)增，獲得高覆蓋率和完整的基因組之后進(jìn)行高通量測(cè)序，進(jìn)而揭示單個(gè)細(xì)胞間的基因差異。因此，在擴(kuò)增過(guò)程中獲得高覆蓋率以及高保真性的擴(kuò)增產(chǎn)物是得到全面準(zhǔn)確測(cè)序結(jié)果的必要條件。

傳統(tǒng)的PCR方法在擴(kuò)增過(guò)程中容易出現(xiàn)較多的擴(kuò)增偏倚、基因缺失等現(xiàn)象，尤其是在單細(xì)胞擴(kuò)增過(guò)程中容易丟失大量序列。而近年來(lái)發(fā)展出來(lái)的MDA（Multiple Displacement Amplification,多重置換擴(kuò)增）技術(shù)不僅具有高分辨率和高基因組覆蓋度，而且具有更好的敏感性和特異性，因而是公認(rèn)較好的單細(xì)胞基因組擴(kuò)增技術(shù)。下面就為大家介紹一款來(lái)自Expedeon公司基于MDA技術(shù)的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒TruePrime^? Single Cell WGA Kit。

TruePrime^?采用MDA技術(shù)，基于新型的TthPrimPol 引物酶和Phi29 DNA聚合酶，擴(kuò)增過(guò)程無(wú)需添加隨機(jī)引物，減少了擴(kuò)增偏倚，提高了擴(kuò)增過(guò)程的覆蓋率和保真性，并且對(duì)于污染的外源DNA不敏感，可重復(fù)性好。TruePrime^?可用于單個(gè)細(xì)胞或少量細(xì)胞的全基因組擴(kuò)增，與常見(jiàn)的NGS平臺(tái)如Illumina和IonTorrent等兼容性良好。

△圖1：基于TthPrimPol 引物酶和Phi29 DNA聚合酶的擴(kuò)增原理

TruePrime^?技術(shù)優(yōu)勢(shì)

No1. 起始樣本量低

△圖2：使用人體全基因組樣本進(jìn)行連續(xù)倍比稀釋后用TruePrime^?進(jìn)行擴(kuò)增，Ion Torrent進(jìn)行測(cè)序分析

結(jié)果表明僅使用1fg 的樣本即可以擴(kuò)增出95%以上的人體基因組片段；而使用隨機(jī)引物擴(kuò)增的結(jié)果中，約有20%不匹配任何生物體的非特異性序列（右下圖）。

No2. 高保真性

△圖3：分離單個(gè)HEK293細(xì)胞，按照TruePrime^?說(shuō)明書(shū)擴(kuò)增3小時(shí)和6小時(shí)，使用PicoGreen試劑盒檢測(cè)DNA產(chǎn)量

分析數(shù)據(jù)表明，TruePrime^?擴(kuò)增結(jié)果和陰性對(duì)照組（原始樣品）的各項(xiàng)數(shù)據(jù)差異均最小。

No3. 高覆蓋率

△圖4：左圖：TruePrime^?擴(kuò)增產(chǎn)物和原始樣本的染色體覆蓋率對(duì)比；

右圖：3號(hào)染色體圖譜的覆蓋模型，TruePrime^?擴(kuò)增得到的DNA與未擴(kuò)增的DNA覆蓋率接近。

擴(kuò)增能力強(qiáng)，無(wú)引物互作，無(wú)擴(kuò)增偏倚，覆蓋率高，保真性好，重復(fù)性好，集諸多優(yōu)勢(shì)于一身的TruePrime^?，還有什么理由不選擇呢？TruePrime^?會(huì)為您的單細(xì)胞測(cè)序工作帶來(lái)極大的便利！除此之外，Expedeon還提供用于擴(kuò)增cfDNA, circular DNA等多種類(lèi)型DNA的試劑盒喲！

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Expedeon（英國(guó)）是世界領(lǐng)先的生物分子結(jié)合技術(shù)和服務(wù)專(zhuān)業(yè)公司。公司為研究機(jī)構(gòu)的科學(xué)家和商業(yè)生產(chǎn)提供相關(guān)試劑產(chǎn)品。公司提供包括基因組學(xué)、免疫學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等相關(guān)產(chǎn)品。主要產(chǎn)品線包括Expedeon^?, Lightning-Link^?, InnovaCoat^?,Thunder-Link^?, RunBlue^?, GELFREE^?, TruePrime^?,Sunscript^?, InstantBlue?等。產(chǎn)品提供給全球的科研實(shí)驗(yàn)室，制藥企業(yè)，生物技術(shù)和診斷公司等。