Th9細(xì)胞：Th9 細(xì)胞是一種新型的輔助性T細(xì)胞的亞群，它對(duì)抗寄生蟲(chóng)感染特別是線蟲(chóng)起著重要作用。IL-4 與 TGF-β同時(shí)作用可誘導(dǎo)初始T細(xì)胞分化成 Th9 細(xì)胞，Th2 細(xì)胞在 TGF-β作用下可轉(zhuǎn)化為 Th9 細(xì)胞。除了分泌抗炎性細(xì)胞因子 IL-10 外，Th9 同時(shí)也與炎性疾病相關(guān)，比如過(guò)敏性炎癥。Th9 細(xì)胞不表達(dá)其它Th細(xì)胞已知的特異轉(zhuǎn)錄因子，包括 T-bet， GATA-3， Foxp3 還有 ROR γt， 其中 GATA-3 在 Th9 分化初期一度出現(xiàn)。分泌的細(xì)胞因子主要為 IL-9 和 IL-10。

小鼠脾臟細(xì)胞Th9極化實(shí)驗(yàn)

1.根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法從小鼠脾臟中分離出細(xì)胞。

2. anti-mouse  CD3ε 包被實(shí)驗(yàn)：在細(xì)胞培養(yǎng)板上，加入 anti-mouse  CD3ε, clone 145-2C11  (5μg/ml)。37℃孵育2小時(shí)或者4℃過(guò)夜。然后將液體輕輕地倒出，用無(wú)菌 PBS 進(jìn)行清洗3次，棄上清。

3.將分離出的脾臟細(xì)胞以1 x 106/ml的濃度種于包被好的培養(yǎng)板中，同時(shí)加入 anti-mouse  CD28, clone 37.51 (5μg/mL)， TGF-β1 (10 ng/mL), IL-4 (10 ng/mL), IL-2 (20ng/ml), anti-mouse  IFN-β (10μg/mL)進(jìn)行培養(yǎng)。

4.細(xì)胞培養(yǎng)3天后，收集細(xì)胞進(jìn)行清洗。然后用含有500 ng/ml PdBU, 500 ng/mL  ionomycin,  以及 Brefeldin  A  的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞進(jìn)行刺激4-5小時(shí)。

5. 細(xì)胞結(jié)束刺激后，收集細(xì)胞，進(jìn)行染色實(shí)驗(yàn)。

相關(guān)實(shí)驗(yàn)材料

RBC  Lysis  Buffer  ( cat. # 420301 )， Anti-mouse  CD3e,  clone  145-2C11  ( LEAFTM  format,  cat. # 100314)， Anti-mouse  CD28,  clone  37.51,  ( LEAFTM  format, cat. # 102112 )， Anti-mouse  IFN-g  ( LEAFTM  format, cat. # 505812 )， Recombinant  mouse  IL-4  ( cat. # 563202 )，R ecombinant  human  TGF-b1  ( carrier-free )  ( cat. # 580702 )， Recombinant  mouse  IL-2  ( cat. # 575402 )，  Brefeldin  A  ( cat. # 420601 )， PMA  ( cat. # P8139  from  Sigma )， Ionomycin  ( cat. # I0634  from  Sigma )

參考文獻(xiàn)：

1. Soler, D. et al. 2006. J Immunol. 117:6940.           

2. Schmitt, E. et al. 1994. J Immunol. 153:3989.

3. Veldhoen, M. et al. 2008. Nat Immunol. 9:1341.      

4. Darhalhon, V. et al. 2008. Nat. Immunol. 9:1347.