這一期和大家介紹一下轉(zhuǎn)座酶。需要詳細(xì)了解的小伙伴們,趕快來看一下吧!
1983年,諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)?lì)C給了81歲的美國遺傳學(xué)家巴巴拉-麥克林托克,因?yàn)樗岢隽恕耙苿?dòng)的控制基因?qū)W說”。麥克林托克先發(fā)現(xiàn)玉米中有的單個(gè)基因是能跳躍的,即從染色體的一個(gè)位置跳到另一個(gè)位置,甚至從一條染色體跳到另一條染色體上。這種會(huì)“跳躍”的基因就是“轉(zhuǎn)座因子”,目前通稱“轉(zhuǎn)座子”(transposon)。
轉(zhuǎn)座子是自然發(fā)生的遺傳因子,最先在玉米中被發(fā)現(xiàn),之后在細(xì)菌、真菌及動(dòng)植物中也都有發(fā)現(xiàn)。如玉米的Ac/Ds、Spm/En類及金魚草的Tam類轉(zhuǎn)座子,果蠅的P因子,來源于鱗翅目昆蟲的piggyBac轉(zhuǎn)座子等。
轉(zhuǎn)座子通過轉(zhuǎn)錄或逆轉(zhuǎn)錄方式,在內(nèi)切酶的幫助下,在生物染色體間移動(dòng)。目前,已知轉(zhuǎn)座子主要通過兩種方式進(jìn)行轉(zhuǎn)座:復(fù)制型轉(zhuǎn)座和非復(fù)制型轉(zhuǎn)座。
復(fù)制型轉(zhuǎn)座即是在轉(zhuǎn)座時(shí),先將轉(zhuǎn)座子DNA轉(zhuǎn)錄形成RNA中間產(chǎn)物,再逆轉(zhuǎn)錄形成新的相同的DNA,新形成的轉(zhuǎn)座子DNA移動(dòng)到其他新位置,而原來的轉(zhuǎn)座子仍保留在原來位置,這個(gè)過程需要轉(zhuǎn)座酶和解離酶的參與;而非復(fù)制型轉(zhuǎn)座則直接從原來的位置切除下來并轉(zhuǎn)移到新的位置,整個(gè)過程不會(huì)形成RNA中間產(chǎn)物,只需要轉(zhuǎn)座酶的參與。
EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子可在體外插入到含有靶DNA的載體。當(dāng)EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子在沒有鎂離子孵育時(shí),形成穩(wěn)定的EZ-Tn5轉(zhuǎn)座體復(fù)合體,可以被電擊進(jìn)入活細(xì)胞,一旦進(jìn)入細(xì)胞中,轉(zhuǎn)座體由細(xì)胞內(nèi)鎂離子活化,就能隨機(jī)插入到宿主的基因組DNA中。
圖1. EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子插入(體外/體內(nèi))
Lucigen提供的EZ-Tn5轉(zhuǎn)座酶是Tn5轉(zhuǎn)座酶的高活性突變形式,是一種高效酶,用于在體外將EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子插入到任何目標(biāo)DNA中。
參考文獻(xiàn)
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Langridge, et al. (2009) Genome Research 19: 2308-2316.
產(chǎn)品信息
美國Lucigen公司成立于1998年,提供各類用于分子生物學(xué)相關(guān)產(chǎn)品,可以使研究者成功克隆較難克隆的基因,其在2016年收購了Illumina旗下Epicentre產(chǎn)品線。目前產(chǎn)品類別主要包括:體外轉(zhuǎn)錄、基因克?。˙AC克隆試劑盒)、感受態(tài)細(xì)胞(TG1噬菌體文庫構(gòu)建感受態(tài))、體外擴(kuò)增、轉(zhuǎn)座子突變、蛋白表達(dá)、文庫構(gòu)建等。
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