首先安利一下Epicentre的專利技術(shù)——CopyControl?克隆系統(tǒng),能夠讓您共享單拷貝和高拷貝的優(yōu)點。CopyControl?克?。菏紫纫詥慰截愋问缴L,單拷貝可以確保插入穩(wěn)定及成功克隆編碼基因序列;在需要的時候,通過誘導(dǎo)液誘導(dǎo)成高拷貝克隆,以便下游應(yīng)用所需。這一系統(tǒng)可以用來構(gòu)建PCR克隆,對于BAC,F(xiàn)osmid文庫等大型質(zhì)粒格外有用。
CopyControl?克隆系統(tǒng)有兩個重要成分,相輔相成,缺一不可:
1.CopyControl? pCC1和pCC2載體
pCC1和pCC2載體含有兩個復(fù)制起始位點:單拷貝的大腸桿菌F-因子復(fù)制子和誘導(dǎo)型的高拷貝oriV。其中OriV的啟動,需要trfA基因產(chǎn)物,由CopyControl?的另一個重要成分——TransforMax? EPI300 E.coli菌株提供。
圖1 pCC1載體圖譜
2.TransforMax? EPI300 E.coli
這是一種工程菌株,含有受誘導(dǎo)啟動子控制的trfA基因,在誘導(dǎo)的條件下可以提供啟動oriV所需要的trfA基因產(chǎn)物。
圖2 TransforMax? EPI300 E.coli菌株基因型
CopyControl?克隆誘導(dǎo)步驟
圖3 CopyControl?克隆流程
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