免疫沉淀 (Immunoprecipitation,IP) 是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后,再與ProteinA/G偶聯(lián)的agarose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G-抗體-目的蛋白復(fù)合物,沉淀經(jīng)過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。
圖1.IP原理及流程
在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)后的WB驗(yàn)證環(huán)節(jié)中,當(dāng)使用常規(guī)的 Anti-IgG (H+L) 酶標(biāo)二抗時(shí),通常會(huì)出現(xiàn)對(duì)應(yīng)免疫沉淀一抗變性后產(chǎn)生的重鏈(50kDa)和輕鏈(25kDa)兩條帶。如果檢測(cè)的目的蛋白分子量在此附近時(shí),就會(huì)受到這兩條帶的干擾。
圖2.傳統(tǒng)二抗WB驗(yàn)證IP,重鏈輕鏈干擾
那么如何避免避免IP檢測(cè)過程中的重、輕鏈干擾,達(dá)科為可為您提供兩種解決方案:
方案一:WB抗體和IP抗體選擇不同種屬
方案二:選擇只識(shí)別天然二硫鍵構(gòu)象的二抗
Rockland TrueBlot?二抗,是一系列單克隆二抗,與傳統(tǒng)二抗不同的是,TrueBlot?二抗只識(shí)別天然二硫鍵的IgG,而不識(shí)別被還原打開的二硫鍵,因此可以消除IP檢測(cè)過程中變性抗體重鏈和輕鏈的影響。
圖3.Rockland TrueBlot?二抗vs 傳統(tǒng)二抗
TrueBlot?系列產(chǎn)品注意事項(xiàng)
1. TrueBlot?產(chǎn)品適用的前提:當(dāng)IP抗體與WB一抗同源。
2. Rabbit TrueBlot?不能與Protein A/G結(jié)合的Beads一起用。推薦TrueBlot?配套的Beads。
3. 非IP驗(yàn)證的WB實(shí)驗(yàn)也可使用TrueBlot?系列產(chǎn)品避免重鏈和輕鏈的影響。
促銷活動(dòng)
促銷活動(dòng)活動(dòng)范圍:Rockland全系列二抗(包括TrueBlot?系列二抗)
活動(dòng)內(nèi)容:請(qǐng)咨詢當(dāng)?shù)貥I(yè)務(wù)員
活動(dòng)時(shí)間:即日起到9.30日
活動(dòng)代碼:DIST-Q3CNSEC
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